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　　液相色譜作為一個(gè)既能用于微量組分的分析測(cè)定，又能用于大量的制備分離的儀器，具有靈活多樣的特點(diǎn)，其應(yīng)用范圍已超過其他各種分離方法，尤其在中藥樣品的分析分離方面更為突出。而液相色譜在使用過程中容易出現(xiàn)一些問題，如果不對(duì)這些問題進(jìn)行解決，就可能會(huì)影響分析結(jié)果，從而影響整個(gè)實(shí)驗(yàn)。因此，今天我們就來討論一下液相色譜使用過程中可能會(huì)出現(xiàn)的問題。
 

　　在液相色譜使用過程中，比較常見的主要有柱壓異常(包括過高或者過低)、峰形異常、基線漂移等。下面我們就來討論一下這幾個(gè)問題的原因和解決方法。
 

　　1、柱壓異常
 

　　柱壓異常包括過高與過低。柱壓過高是常見的問題，指的是壓力突然升高，一般都是由于流路中有堵塞的原因。此時(shí)，我們應(yīng)該分段進(jìn)行檢查。
 

　　2、峰形異常
 

　　1)所有峰均為負(fù)峰。解決方法：信號(hào)電纜接反或檢測(cè)器輸出極性設(shè)置顛倒；光學(xué)裝置尚未達(dá)到平衡。

　　2)所有峰均為寬峰。解決方法：系統(tǒng)未達(dá)到平衡；溶解樣品的溶劑極性比流動(dòng)相差很多；色譜柱尺寸及類型選擇不正確；色譜柱或保護(hù)柱被污染或柱效降低；溫度變化造成的影響。

　　3)色譜圖中未出峰。解決方法：系統(tǒng)未進(jìn)樣或樣品分解；泵未輸液或流動(dòng)相使用不正確；檢測(cè)器設(shè)置不正確；針對(duì)以上情況成因作相應(yīng)調(diào)整即可。

　　4)一個(gè)峰或幾個(gè)峰是負(fù)峰。解決方法：流動(dòng)相吸收本底高；進(jìn)樣過程中進(jìn)入空氣；樣品組分的吸收低于流動(dòng)相。

　　5)所出峰比預(yù)想的小。解決方法：樣品黏度過大；進(jìn)樣品故障或進(jìn)樣體積誤差；檢測(cè)器設(shè)置不正確；定量環(huán)體積不正確；檢測(cè)池污染；檢測(cè)器燈出現(xiàn)問題。

　　6)出現(xiàn)雙峰或肩峰。解決方法：進(jìn)樣量過大；樣品濃度過高；保護(hù)柱或色譜柱柱頭堵塞；保護(hù)拄或色譜柱污染或失效；柱塌陷或形成短通道。

　　7)前伸峰。解決方法：進(jìn)樣量或樣品濃度高；溶解樣品的溶劑較流動(dòng)相極性強(qiáng)；保護(hù)柱或色譜柱污染或失效。

　　8)拖尾峰。解決方法：柱超載，降低樣品量；增加柱直徑采用較高容量的固定相；峰干擾，對(duì)樣品進(jìn)行清潔過濾；調(diào)整流動(dòng)相；硅羥基作用，加入三乙胺，用堿致鈍化柱增加緩沖液或鹽的濃度降低流動(dòng)相pH值；柱內(nèi)燒結(jié)不銹鋼失效，更換燒結(jié)不銹鋼；加在線過濾器，對(duì)樣品進(jìn)行過濾；死體積或柱外體積過大，將連接點(diǎn)降至低；盡可能使用內(nèi)徑較細(xì)的連接管；柱效下降，更換柱子；采用保護(hù)柱，對(duì)柱子進(jìn)行再生。

　　9)出現(xiàn)鬼峰。解決方法：進(jìn)樣閥殘余峰，在每次進(jìn)完樣后用充足的時(shí)間來平衡和清洗系統(tǒng)；樣品中存在未知物，改進(jìn)樣品的預(yù)處理；流動(dòng)相污染，更換新流動(dòng)相，盡可能現(xiàn)配現(xiàn)用，隔夜的流動(dòng)相再次使用時(shí)要過濾；盡可能使用HPLC級(jí)試劑；流路中有小的氣泡，打開Purge閥，加大流速排除。

　　10)出現(xiàn)平頭峰。解決方法：檢測(cè)器設(shè)置不正確；進(jìn)樣體積太大或樣品濃度太高。
 

　　3、基線漂移
 

　　一般說來，機(jī)器剛起動(dòng)時(shí)，基線容易漂移，大概要半個(gè)小時(shí)的平衡時(shí)間，如果你用了緩沖溶液或緩沖鹽，還有就是在低波長(zhǎng)下(220nm)平衡時(shí)間相對(duì)會(huì)比較長(zhǎng)，但如果你在實(shí)驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)基線漂移，則你要考慮下面的原因：

　　1)流通池被污染或有氣體。解決方法：用甲醇或其他強(qiáng)極性溶劑沖洗流通池(斷開柱子更好)。如有需要，可以用1N的硝酸(不要用鹽酸)；

　　2)柱溫波動(dòng)。解決方法：控制好柱子和流動(dòng)相的溫度，檢查是否有打開的窗戶或空調(diào)對(duì)著柱溫箱；

　　3)紫外燈能量不足。解決方法：更換新的紫外燈；

　　4)檢測(cè)器沒有設(shè)定在大吸收波長(zhǎng)處。解決方法：將波長(zhǎng)調(diào)整至大吸收波長(zhǎng)處；

　　5)流動(dòng)相污染、變質(zhì)或由低品質(zhì)溶劑配成。解決方法：檢查流動(dòng)相的組成，使用高品質(zhì)的化學(xué)試劑及HPLC級(jí)的溶劑；

　　6)樣品中有強(qiáng)保留的物質(zhì)(高K’值)以饅頭峰樣被洗脫出，從而表現(xiàn)出一個(gè)逐步升高的基線。解決方法：使用保護(hù)柱，如有必要，在進(jìn)樣之間。在分析過程中，定期用強(qiáng)溶劑沖洗柱子；

　　7)流動(dòng)相的PH值沒有調(diào)節(jié)好。解決方法：加適量的酸或堿調(diào)至合適PH值。
 

　　總的來說，在遇到問題時(shí)，需要按照排除法依次確定導(dǎo)致問題的原因，之后要做的就是修正和調(diào)整并且記錄問題，只要做好這樣的工作就不怕以后會(huì)出現(xiàn)問題。