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液質(zhì)聯(lián)用儀常用的離子源有哪些類型?
點(diǎn)擊次數(shù):10945 更新時(shí)間:2021-01-22
液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀,簡(jiǎn)稱液質(zhì)聯(lián)用儀(LC/MS或LC/MS/MS),常用離子源從大的分類來(lái)說(shuō),主要有大氣壓離子源(以下簡(jiǎn)稱API)、基質(zhì)輔助激光解析電離源(以下簡(jiǎn)稱MALDI)和快原子轟擊源(以下簡(jiǎn)稱FAB)三種電離方式。
 
1、大氣壓離子源(API)  :
包括大氣壓電噴霧電離ESI、大氣壓化學(xué)電離APCI、大氣壓光電離APPI
1)大氣壓電噴霧電離ESI  
在ESI中,離子的形成是被測(cè)分子在帶電液滴的不斷收縮過(guò)程中噴射出來(lái)的,即離子化是在液態(tài)下完成的。經(jīng)液相色譜分離的樣品溶液流入離子源。在N2流下汽化后進(jìn)入強(qiáng)電場(chǎng)區(qū)域,強(qiáng)電場(chǎng)形成的庫(kù)侖力使小液滴樣品離子化,借助于逆流加熱N2分子離子顆粒表面液體進(jìn)一步蒸發(fā),使分子離子相互排斥形成微小分子離子顆粒如圖所示。這些離子可能是單電荷或多電荷,這取決于所得的帶有正、負(fù)電荷的分子中酸性或堿性基團(tuán)的體積和數(shù)量。多電荷離子峰的形成使質(zhì)量范圍為3000u的四極桿濾過(guò)器質(zhì)譜儀也能檢測(cè)到生物大分子的準(zhǔn)確分子量。  
 
ESI的優(yōu)點(diǎn):  
可生成高度帶電的離子而不發(fā)生碎裂,這樣可將質(zhì)荷比降低到各種不同類型的質(zhì)量分析儀都能檢測(cè)的程度。通過(guò)檢測(cè)帶電狀態(tài),可計(jì)算離子的真實(shí)分子量。同時(shí),解析分子離子的同位素峰也可確定帶電數(shù)和分子量,因同位素峰間的質(zhì)荷比差與帶電數(shù)相對(duì)應(yīng)。優(yōu)勢(shì)是可方便地與分離技術(shù)聯(lián)用。  
 
ESI的缺點(diǎn):  
ESI的主要缺點(diǎn)是它只能接受非常小的液體流量(1-10μl/min),這一缺點(diǎn)已被1987年研制出來(lái)的離子噴霧接口(ISP)所克服(離子噴霧接口是一種借助氣動(dòng)的電噴霧接口,它可適應(yīng)較高的流速)。  

2)大氣壓化學(xué)電離APCI  
APCI技術(shù)與傳統(tǒng)的化學(xué)電離接口不同,它并不采用諸如甲烷一類的反應(yīng)氣體,而是借助電暈放電啟動(dòng)一系列氣相反應(yīng)以完成離子化過(guò)程,就其原理,它也可被稱為放電電離或等離子電離。從液相色譜流出的樣品溶液進(jìn)入一具有霧化氣套管的毛細(xì)管,被氮?dú)饬黛F化,通過(guò)加熱管時(shí)被氣化。在加熱管端進(jìn)行電暈放電,溶劑分子被電離,充當(dāng)反應(yīng)氣,與樣品氣態(tài)分子碰撞,經(jīng)過(guò)復(fù)雜的反應(yīng)過(guò)程,樣品分子生成準(zhǔn)分子離子,準(zhǔn)分子離子也能以負(fù)離子模式生成準(zhǔn)分子離子,主要應(yīng)用于具有強(qiáng)的電子親和力的化合物。樣品分子的準(zhǔn)分子離子經(jīng)篩選狹縫,進(jìn)入質(zhì)譜計(jì)。  

3)大氣壓光電離APPI  
APPI是一種被分析物在氣相中吸收由真空-紫外發(fā)出的電子(10eV或10.6eV)后放出電子而離子化的過(guò)程,APPI使用較少。APPI是直接將待測(cè)物電離,比較適合非極性或弱極性化合物的分析。  
 
APCI&APPI的優(yōu)點(diǎn):  
適用于低極性化合物離子化;寬度動(dòng)態(tài)范圍(4-5個(gè)數(shù)量級(jí));質(zhì)量敏感,可耐受高緩沖液濃度  
 
APCI&APPI的缺點(diǎn):  
化合物熱穩(wěn)定性低(高130-150℃),易揮發(fā),需要摻雜劑 
 
2、基質(zhì)輔助激光解析電離源(MALDI)  
在一個(gè)微小的區(qū)域內(nèi),在極短的時(shí)間間隔(ns數(shù)量級(jí))中,激光對(duì)靶上待分析物質(zhì)提供高強(qiáng)度脈沖式能量,使其在瞬間完成解吸和電離,且不產(chǎn)生熱分解。MALDI是一種直接氣化并離子化非揮發(fā)性樣品的質(zhì)譜離子化方式,但是其離子化機(jī)理尚不清楚,存在兩種可能性:離子在固態(tài)時(shí)已形成,激光照射時(shí)只是簡(jiǎn)單的釋出;或是由激光引發(fā)的離子-分子反應(yīng)產(chǎn)生的。  
 
MALDI的優(yōu)點(diǎn):  
可電離一些較難電離的樣品(特別是生物大分子),得到完整的電離產(chǎn)物,且無(wú)明顯碎片;單電荷分子離子峰占多數(shù),質(zhì)譜圖較簡(jiǎn)單,適合多組分樣品的分析;適用范圍廣,能耐受一定程度的鹽和緩沖液;對(duì)樣品處理的要求不嚴(yán)格,甚至可以直接分析未處理過(guò)的生物樣品,從而簡(jiǎn)化繁瑣的制樣過(guò)程;靈敏度高。 
 
MALDI的缺點(diǎn):  
然而在有機(jī)小分子、煙草煙氣化學(xué)成分定性定量分析方面則應(yīng)用較少。  

3、快原子轟擊源(FAB)  
用加速的中性原子(快原子)撞擊以甘油(底物)調(diào)和后涂在金屬表面的有機(jī)化合物(“靶面”),導(dǎo)致這些有機(jī)化合物電離的方法稱之為快原子轟擊(FAB)。以電子轟擊氣壓約為100Pa的中性氣體(氬或氦),產(chǎn)生的惰性氣體離子經(jīng)聚焦和加速后撞擊靶面導(dǎo)致分析物的離子化稱作離子轟擊作用。在此基礎(chǔ)上將氬離子還原為中性原子,再以加速的中性原子撞擊“靶面”即為快原子轟擊。分析物經(jīng)中性原子的撞擊獲取足夠的動(dòng)能以離子或中性分子的形式由靶面逸出,進(jìn)入氣相。產(chǎn)生的離子一般是準(zhǔn)分子離子。  

FAB的優(yōu)點(diǎn):  
對(duì)熱不穩(wěn)定、難以汽化的化合物的分析有獨(dú)到的長(zhǎng)處。尤其是它對(duì)肽類和蛋白質(zhì)分析的有效性,在電噴霧接口出現(xiàn)前是其他接口無(wú)法相比的。FAB在肽類和蛋白質(zhì)分析方面有大量的報(bào)道和成功的蛋白質(zhì)分析實(shí)例,顯示出在此領(lǐng)域內(nèi)很強(qiáng)的實(shí)用性。  

FAB的缺點(diǎn):  
只能在低流量下工作(<5μl/min),嚴(yán)重限制了液相柱的分離效果。流動(dòng)相中含有的1%-5%的甘油會(huì)使離子源很快變臟。液體通過(guò)石英毛細(xì)管時(shí)容易造成堵塞。此外,由于它的特殊的制樣方法,F(xiàn)AB的一個(gè)很大的問(wèn)題是混合物樣品中共存物質(zhì)的干擾,它們常常會(huì)抑制分析物的離子化,造成靈敏度下降甚至根本沒(méi)有信號(hào)產(chǎn)生。

 
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